神經性貝類毒素抗原

免疫分析法是基于抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應而建立起來的一種生物化學分析法，即根據抗原-抗體反應，采用特異性抗體來檢測藥物、激素、蛋白質、微生物等物質的定量分析方法。免疫分析法主要包括酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、放射性免疫法、熒光免疫法等，具有方便、快速的特點，但也存在一定的缺點，如費用較高、毒素之間的交叉反應難避免、實驗結果重現性較差等。

ELISA是檢測海洋生物毒素所采用的主要免疫方法。該技術可用目測，也可用酶標儀測定光密度值，具有易定性定量的優(yōu)點^[6]。Tsao等^[7]采用單克隆抗體ELISA檢測法檢測ASP中的軟骨藻酸(domoic acid, DA)，并建立了基于單克隆抗體的膠體金免疫條檢測法；該方法的檢測限為5 ng/mL，在10 min內就可完成測定，提示免疫條檢測可用來快速檢測貝類樣品中的DA。也有研究者建立了基于基因工程單鏈抗體競爭ELISA檢測方法，該方法最大的優(yōu)勢是毒素可在大腸桿菌中快速、大量得到表達，且容易和其他小分子融合，形成融合蛋白以用于檢測或其他用途；對該方法進行驗證發(fā)現，其與標準高效液相色譜法(high-performance liquid chromatography, HPLC)檢測結果有較好的相關性^[8]。李軍濤等^[9]建立DSP免疫熒光層析試紙條檢測方法，靈敏度可達0.125 μg/mL，達到我國貝類產品中DSP所允許的*。Dubois等^[10]建立了間接競爭ELISA方法檢測STX，該方法用毒素的偶聯(lián)物免疫產生的抗體來檢測貽貝、牡蠣和扇貝中的STX類毒素；在檢測之前，用90%的乙醇溶液將STX類毒素從貝類組織里快速提取出來，該方法的*檢測限為5 μg/kg。Garthwaite等^[11]也建立了4類貝毒的ELISA方法，均可滿足貝類提取物中樣品的鑒定，且樣品回收率較高。TTX為氨基全氫喹唑啉型化合物，是自然界中所發(fā)現的毒性最大的神經毒素之一^[12]。Thattiyaphong等^[13]建立了一種側流免疫層析技術來實現TTX的快速檢測，并運用該方法檢測了河鲀及食用魚中TTX的含量；與液相色譜-串聯(lián)質譜法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)相比，該方法的靈敏度為94.0%，特異性為92.4%。總的來說，側流免疫層析技術可用于大批量樣本的篩選，陽性結果的樣本再使用LC-MS/MS進行確認，減少了LC-MS/MS的測試量，降低了檢測成本。Reverte等^[14]開發(fā)了一種基于雙硫醇自組裝單分子膜的新ELISA方法，該方法可用于檢測河鲀中TTX的含量，檢測限為0.23 mg/kg，其與LC-MS/MS法的相關性為0.991。

大田軟海綿酸(okadaic acid, OA)是DSP中的主要成分，屬于聚醚類海洋生物毒素，尚無致死病例，但長期攝入可以致畸及致